2024年全国艾滋病检测实验室质量控制指南解读与分析：实验方法与试剂详解
2024 年发布了《全国艾滋病检测实验室质量控制指南》及相关政策文件。从检验科的角度来看，从试剂厂家的角度来看，以下是对该指南的解读与分析：一、重要内容提炼（实验方法与试剂相关）1.实验方法
血清学检测包含多种试验类型。其中有酶联免疫吸附试验（ELISA）。还有化学发光/免疫荧光试验。以及快速检测试验，像胶体金法。这些试验用于 HIV 抗体/抗原的筛查和补充试验，即免疫印迹法。
核酸检测包含实时荧光定量 PCR 检测 HIV-1 RNA 或 DNA，此检测可用于病毒载量的测定以及基因型耐药的分析。
CD4+T 淋巴细胞计数可通过流式细胞术（双平台法或单平台法）来进行，也可借助即时检测设备（POCT）。
基因型耐药检测：通过 PCR 测序法或者商品化试剂盒来进行。它主要是对蛋白酶（PR）、逆转录酶（RT）、整合酶（IN）的基因区进行耐药突变的分析。
2.试剂管理
试剂的选择需要经过国家药监局注册，其中包含了 HIV 抗体/抗原检测试剂，还有核酸提取/扩增试剂以及 CD4 检测试剂等。
试剂验证方面：新批次的试剂需要进行平行比对，例如检测弱阳性样本以及阴性样本；同时还需要通过商业质控品验证，要进行 5 次重复检测。
保存要求：
快速检测试剂需在室温下避光保存，并且温湿度要处于可控状态。
酶联免疫试剂需要在 2 至 8 摄氏度的温度下冷藏。发光类试剂要按照说明书的要求，根据不同条件进行保存。
核酸试剂，例如扩增酶，需要在零下 20℃及以下的温度进行保存。而冻干试剂则可以在室温环境下保存。
CD4检测试剂（荧光标记抗体）需2~8℃避光保存。
艾滋病检测实验室的生物安全管理是另一方面。
第一章 质量管理
核心要素包括人员资质，需进行分级培训考核；环境设施要分为 BSL-2/3 区；设备要进行校准维护；试剂要进行验收保存；检测方法要进行验证；信息系统要确保安全；文件记录需保存 1 至 10 年。
人员管理方面，包括上岗前进行培训，培训分为县级、市级、省级等不同级别；同时还会进行持续的能力评估，评估方式有比对以及盲样测试。
第二章 生物安全管理
HIV 属于二类病原微生物，进行实验活动需要在 BSL-2/3 实验室中进行。
个人防护装备属于防护措施之一；样本消毒也是防护措施的一部分，包括高压灭菌和次氯酸钠；废弃物分类处理同样是防护措施的内容。
职业暴露的处置包括局部处理，比如进行冲洗或消毒；以及在 72 小时内服用暴露后预防药物（PEP）。
第二篇 艾滋病检测的室内质量控制
第一章 总论
质控规则：
定量检测包括 1:3s（失控）、2:2s（系统误差）以及 R4s（随机误差）。
定性检测：质控品结果与预期一致（弱阳性/阴性）。
质控图用于进行 Levey - 图分析。它可以分析位移，也就是系统误差；还可以分析趋势，即试剂失效。
第二章 抗体/抗原检测质控
筛查试验中，每批次会加入外部质控品，这些质控品包括弱阳性和阴性两种。并且会将这些质控品随机放置在酶标板的孔位上。
确证试验时，试剂盒内的对照（包括强阳性、弱阳性以及阴性对照）需要符合条带判读规则。例如，阴性对照不能出现特异性条带。
第三章 CD4+ T淋巴细胞检测质控
流式细胞术：每日开机后要使用荧光微球来校准光路。质控品包括全血和商品化的，并且这些质控品需要覆盖低值范围。
即时进行检测，其中包括标准板的校准，要求变异系数需≤5%；同时还进行设备的自检，包含光路、分辨率以及温度等方面的检查。
第四章 核酸检测质控
RNA/DNA 检测时，每批次要加入外部质控品，这些外部质控品的浓度范围是 1000 到 15000 拷贝/mL。同时，要避免对外部质控品进行反复冻融操作，且冻融次数应不超过 3 次。
试剂盒内置有质控模块，比如扩增曲线阈值。同时，外部质控品需要覆盖低病毒载量。
第五章 基因型耐药检测质控
进行耐药片段的获取时：要同步检测阳性对照（其中包含耐药突变）以及阴性对照，同时还要监测实验室是否存在污染情况，比如阴性对照出现扩增阳性的现象。
序列分析时，双人对混合碱基（采用 IUPAC 编码）进行判读，在构建系统进化树的过程中会排除污染序列。
第三篇 艾滋病检测的室间质量评价
第一章 总论
要素包括提供者资质，例如具备 CNAS 认可；还有质控品的均一性以及稳定性；同时包含统计分析，如 SDI 指数。
流程：计划制定→质控品分发→结果回报→数据分析→反馈报告。
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第二章 抗体/抗原检测室间质评
质控品的设计涵盖了不同的 S/CO 值，例如在临界值附近。同时还进行了检测方法之间的比对，包括 ELISA 和化学发光。
第三章 CD4+ T淋巴细胞室间质评
评价指标包括绝对计数偏差，其标准为±2SD；还包括百分比一致性，其标准为 CV≤10%。
第四章 核酸检测室间质评
难点在于病毒载量进行对数转换（即 lg 值的差异要小于等于 0.5），以及亚型的覆盖情况（例如采用“/”来表示）。
第五章 基因型耐药室间质评
耐药突变位点的判读一致性要达到≥95%，并且系统进化树的聚类分析值要≥70%。
结语
2024 版艾滋病检测质控指南的核心是“精准防控”。它通过三个方面来推动检测全链条升级，一是实现实验室标准化，二是强化人员资质，三是使试剂合规适配。
检验科要把重点放在流程的优化以及质控的管理上。试剂厂家需要加快技术的更新换代以及服务的响应速度。
双方进行协同创新，这样就能够实现检测达到“零误差”的目标，并且能够为终结艾滋病的流行提供坚实的保障。
本文对艾滋病检测实验室的全流程质控要求进行了系统规范。其核心是利用标准化的实验方法，对试剂进行严格管理，采取分级的生物安全措施，以及建立室内/室间质评体系，以此来确保检测结果的准确性，从而为艾滋病防控提供可靠的技术支撑。
2024 版指南对检验科和试剂厂家提出了更高要求。它细化了实验室管理，强化了质量控制，进行了技术更新。检验科要加强人员培训，优化流程。试剂厂家需提升技术适配性，增强服务支持能力。双方协同合作，以推动艾滋病检测的精准性和可及性。
更多细节能够参考《全国艾滋病检测实验室质量控制指南》的原文以及与之配套的地方标准。
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- 校准要求和频次：阐述了对这些设备进行校准的具体要求以及校准的频次。
通用设备
生物安全柜
-日常维护：用75%乙醇清洁表面，检查气流和警报。
-定期维护：每年由专业人员检测紫外灯、高效过滤器。
-频次：每年1次（安装后、维修后需额外检测）。
-项目：垂直气流速度、气流模式、高效过滤器检漏、洁净度。
高压灭菌器
-日常维护：每次灭菌后清洁灭菌室，定期清洗探头和水位计。
-定期维护：检查压力表和安全阀。
-频次：每年1次（安装后、维修后需额外检测）。
项目包含灭菌效果（化学/生物指示剂），以及对压力表的检测要求为半年 1 次，对安全阀的检测要求为每年 1 次。
移液器
-日常维护：检查漏液，正确安装吸头，避免倒置放置。
-定期维护：外部清洁，查看损坏。
-频次：每年至少1次。
-项目：体积准确度和精密度。
离心机
-日常维护：使用前自检，使用后开盖散热。
-定期维护：润滑主轴，清理散热器。
-频次：每年1次。
-项目：转速校准（冷冻离心机需校准温度）。
冰箱
-日常维护：每日记录温度，清理散热网（每季度1次）。
-频次：温度记录设备每年1次校准。
血清学检测设备
酶标仪
-日常维护：工作日核对滤光片波长，每年清洗滤光片。
-频次：每年至少1次。
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-项目：波长准确性、吸光度线性。
洗板机
-日常维护：检查管道通畅性，每月检查洗涤孔对位。
-频次：每年至少1次。
-项目：洗涤均匀性、负压稳定性。
化学发光仪
-日常维护：定期定标，完成日/周/月保养。
-频次：每年1次（厂家校准）。
-项目：发光信号稳定性、背景噪声。
CD4+ T淋巴细胞检测设备
流式细胞仪
-日常维护：开机时用荧光微球校准光路，清洗管路。
-定期维护：半年整体保养，每月PMT检测。
-频次：半年整体保养，每月PMT检测。
-项目：激光稳定性、荧光灵敏度。
即时CD4检测设备
-日常维护：每次开机运行内质控，使用后清洁仪器。
-频次：每年整体保养1次。
-项目：检测精度、温度控制。
核酸检测设备
核酸提取仪
-日常维护：实验后紫外消毒30分钟，避免强碱清洁。
-定期维护：清理实验舱。
-频次：每年1次。
-项目：温度均匀性、振动频率、核酸回收率一致性。
PCR扩增仪
-日常维护：清洁外观，避免灰尘进入。
-定期维护：检查制冷组件。
-频次：每年1次。
-项目：孔间温度差（≤±0.5℃）。
荧光PCR仪
-日常维护：清洁样本孔（每3个月1次），维护光路系统。
-定期维护：热循环组件保养。
-频次：每年1次。
-项目：荧光信号强度、温度准确性。
测序设备
-日常维护：每周清洁表面，检查部件运行。
-定期维护：软件更新，校准读长。
-频次：每年1次。
-项目：读长重复性、序列准确率、GC含量偏差。
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